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    自体血注射非人灵长类脑出血模型

    原创版权
    咨询量:  
    更新时间:2025-03-15  /
    咨询工程师

    模型信息

    中文名称:自体血注射非人灵长类脑出血模型

    英文名称:NA

    类型:出血性脑卒中动物模型

    分级:NA

    用途:用于出血性脑卒中(Intracerebral Hemorrhage,ICH)研究。

    研制单位:中国医学科学院医学实验动物研究所

    保存单位:中国医学科学院医学实验动物研究所

    研究背景

    一、疾病名称

    出血性脑卒中(IntracerebralHemorrhage,ICH)

    二、ICH简介

    脑出血(IntracerebralHemorrhage,ICH)是指小动脉、毛细血管破裂等原因引起的原发性非外伤性脑实质内出血,具有发病率高、病死率高、致残率高的特点。

    病因:常见病因是高血压合并小动脉硬化,微动脉瘤或者微血管瘤,其他包括脑血管畸形、脑膜动静脉畸形、淀粉样脑血管病、囊性血管瘤、颅内静脉血栓形成、特异性动脉炎、真菌性动脉炎,烟雾病和动脉解剖变异、血管炎、瘤卒中等。

    临床症状:运动和语言障碍、呕吐、意识障碍、眼部症状、头痛头晕等。

    治疗:世界范围内脑出血的患病率为10-20/10万并随着年龄的增长而升高。ICH发病后30天内的死亡率为35%-52%,其中半数的患者发病后2天内死亡,仅38%的患者ICH后存活超过1年。即使能够存活,生活质量也受到影响。目前内科处理措施多为降血压、降颅压、激素治疗;外科治疗主要为手术清除颅内血肿。

    制备方法

    1、模型制作

    1.1术前12h禁食,6h禁水。取股动脉抗凝血3ml(肝素钠40单位/ml)后,氯胺酮15mg/kg对动物进行麻醉,当动物出现呼吸浅慢、角膜反射迟钝,为麻醉适度表现。

    1.2立体定向术:麻醉后的动物采用俯卧位固定在立体定位仪上,颅顶区备皮,常规消毒手术区皮肤,沿矢状面在颅顶正中切开长约4-5cm的切口,逐层分离皮下组织、帽装肌腱、肌肉、骨膜,用扩张器充分暴露手术视野。根据食蟹猴脑立体定位图谱定位穿刺针,其初始坐标为Antero-posterior 2.6,depth18.2,lateral 48.5.用记号笔在进针处做好标记。使用便携式颅钻进行颅骨钻孔,以钻透颅骨,达硬脑膜为止(有落空感)。用浸透生理盐水的无菌纱布覆盖伤口。

    1.3 吸取抗凝血1.5ml,将注射器固定在操作壁上,使用7号穿刺针沿定向孔进针将动脉血注射至右侧基底节区屏状核内侧,每5分钟注射0.5ml,每次注射间隔5min,注射完毕后留针15min。

    1.4 拔出穿刺针,缝合骨膜、皮肤。术后3d肌肉注射青霉素40万U预防感染。

    评价验证

    2.1 行为学评价:术后1、2、3、7、14、21、28d内,使用经过修改、细化的Kito灵长类动物神经功能损害评分表对模型动物进行意识、骨骼肌肉协调、感觉系统、意识系统的行为学相关测试。术后1、2、3、7、14、21、28d,动物的平均行为学得分为28.97±1.29 、27.01±2.87、24.93±1.89、23.65±1.33、23.01±2.87、22.98±1.56、22.87±1.44分,8只动物在麻醉苏醒后均出现了与血肿部位相对应的神经系统定位体征。主要表现为动物苏醒后表现为有意识但情绪低落且不反抗。骨骼肌出现共济失调。对脚趾疼痛有弱的、不完全的 、不协调的收缩反应。左前肢出现明显的麻痹,失去运动能力。

    2.2 影像学检查:

    1)头颅MRI扫描:造模后24h,以后每周一次进行MRI检查,观察血肿及周围的水肿、血肿情况;仪器型号:Philips Intera Achiva 3.0T磁共振仪,8道头部线圈。将动物麻醉后固定于免磁的头架上,放入头部线圈内。T1扫描序列为IR,视野:120mm,TR/TE:2153ms/13/ms,层厚/间隔:3mm/0.3mm,矩阵256X256。MRI扫描可见血肿腔位于右侧基底节区,为等T1短T2信号急性期血肿影,周围有长T1长T2信号薄环形水肿影,中线向左侧移位。右侧侧脑室明显受压变形,右侧壳核,丘脑受压变形。

    2)18F-FDG-PET头颅扫描:仪器:SiemensECAT EXACT HR+ 型高分辨PET仪(32环BGO晶体,空间分辨率5mm)。造模后24h及7、14、21、28d进行PET扫描。方法:动物麻醉后从股静脉注入 37-47MBq(1.0-1.3mCi)的 18F-FDG,30min后行PET检查,采用3D采集模式,扫描时间10min。以血肿最大层面为测量层面,分别先取基底节核团、血肿周围及各脑叶RIO。观察血肿周围能量代谢情况。结果可见右侧基底节区注血部位大片代谢缺损区,注射周围大脑皮层、右侧壳核与对侧相应结构比较SUV值明显降低,血肿侧丘脑、尾状核SUV值亦较对侧减低。

    2.3 组织病理学检查:造模2w、4w后处死动物,动物麻醉后开胸,经生理盐水及10%中性福尔马林心脏灌注后,取脑组织进行固定、切片,通过H.E染色、特殊染色等染色方法观察出血灶周围的病理学改变。大体解剖未见异常。镜下:大部分损伤部位的脑组织已被多量吞噬含铁血黄素的泡沫细胞所取代,其间尚可见少许未被吸收的血液。损伤局部周围可见多量泡沫细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞浸润,部分损伤脑组织已被肉芽组织机化。其余组织未见异常。

    生物安全性

    实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(ILAS-GC-2012-001)。

    讨论与结论

    动物症状观察:

    表现为体重减轻、弓背竖毛,在回输后的一个月后死亡。

    了解中析

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